A Membrana Amniótica humana (MAh) é uma película fina, sendo a mais interna das membranas fetais e geralmente é descartada após o parto. Para uso clínico, em alguns casos precisa ser submetida ao processo de desepitelização. Este estudo, teve como objetivo, analisar o tempo de desepitelização da MAh utilizando água ozonizada e ultrassom. Trata-se de um estudo experimental e comparativo, utilizando um sistema hidrodinâmico que combina água ozonizada e ultrassom. Para o experimento, uma MAh que foi segmentada em sete amostras, uma foi controle e seis foram processadas no sistema por diferentes tempos (10, 20, 30, 40, 50 e 60 min). Na primeira etapa foi a ozonização prévia, que foi realizada por 10 min até alcançar um nível de concentração de 3,0 mg/L de ozônio. Na segunda etapa, as amostras foram posicionadas no centro do reservatório e iniciado o experimento. As duas etapas foram repetidas para cada amostra. As propriedades morfológicas das amostras, foram analisadas por histologia e microscopia eletrônica de varredura. Foi possível perceber que a partir de 30 min, o epitélio começa a sofrer alterações. Contudo, com 50 min as alterações são mais visíveis, perdendo sua morfologia original, já com 60 min foi possível perceber a presença de poucas células epiteliais, pequenas alterações na estrutura da membrana basal e a preservação do estroma. Assim, a combinação da água ozonizada e ultrassom, apresenta potencial para o processo de desepitelização da MAh, com tempo acima de 50 min.